Kanser Tedavisinde İmmün Denetim Noktalarını Hedefleyen Adenoviral Gen Tedavisi Vektörleri Geliştirilmesi

Abstract

Hedefe yönelik tedaviler son yıllarda rutin kullanımda bir hayli öne çıkmıştır. Özellikle 201?lu yıllardan itibaren immün sistemi hedefleyen tedaviler büyük ivme kazanmıştır. Kanser gelişimi esnasında tümör dokusunda immün sistemi baskılamaya yönelik başta immün denetim noktası inhibitörleri kanser tedavisinde öne çıkmıştır. Ancak son 10 yılda bu ilaçların etkinliğinin belli özelliklere sahip tümörlerle sınırlı olduğu ve yine bu amaçla kullanılan monoklonal antikorların sistemik yan etkileri ciddi sorun olarak karşımıza çıkmaya başlamıştır. Gen tedavileri son 30-40 yılda çok fazla çalışılmış olmasına karşın klinikte kullanıma girememiş bir tedavi modalitesidir. Kanser gen tedavisin özellikle immün hedeflere yönlendirilmesi bu alanda ümit vadeden yaklaşımlardan biridir. Bu proje kapsamındaCTLA4 ve PD1 moleküllerinin hedefleyen tek zincir antikorlarının viral vektörler aracılığıyla tedavide kullanılması amaçlanmıştır. Bu projede, sıçanlar fare PD1 ve CTLA4 proteinleri ile immünize edilerek bu proteinlere karşı uyarılmış olan dalak lenfositlerinden RACE-PCR yöntemi ile ilgili genler izole eidlmiş ve faj gösterim yöntemi ile CTLA4 ve PD1 antijenlerine en iyi bağlanan antikor genleri elde edilmiştir. Daha sonra bu genlerin antikorların değişken bölgelerini kodlayan ağır (VH) ve hafif (VL) zincir bölgeleri birleşitirilerek tek zincir antikor genleri oluşturarak replikasyon defektif tip 5 adenoviral vektörlere yerleştirilmiştir. CMV promoteri da eklenen bu vektörler (AdCMVCTLA4scFv, AdCMVPD1scFv) invitro olarak ilgili antikorları başarı ile sentez ettirmiştir. Kontrol vektör olarak inşa ettiğimiz intihar gen vektörü (AdCMVCD) ile karşılaştırıldığında 4T1 meme kanseri modelinde AdCMVCTLA4scFv ve AdCMVPD1scFv daha iyi tümör kontrolü ve immünolojik cevap sağladığı bulundu. Proje kapsamında inşa etmiş olduğumuz CTLA4 ve PD1 immün denetim noktalarını hedefleyen adenoviral gen tedavi vektörleri özellikle lokal uygulamalar ile hastalarda yan etki riskini en aza indirerek tedavi seçeneği sağlama potansiyeline sahiptir.